### 背景介绍

谷胱甘肽（GSH）作为细胞内关键的抗氧化剂，其浓度的高低直接反映了肿瘤细胞的氧化还原状态。在肺癌细胞中，通常依赖于较高的GSH水平来抵御放化疗过程中产生的活性氧（ROS），这也是导致治疗抵抗的一个重要因素。GSH作为谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）的辅因子，可以有效抑制铁死亡，而GSH的消耗则会导致GPX4失活，进而促进铁死亡。因此，监测GSH水平的变化可作为铁死亡的重要标记。通过动态检测GSH，能够评估治疗是否激活了氧化应激与铁死亡通路。此外，GSH的检测也为验证GSH响应性药物的释放效率提供了依据，从而实现肿瘤的特异性激活。

### 谷胱甘肽检测在治疗肺癌研究中的应用

2025年5月8日，复旦大学药学院的陈依婷博士团队在《Journal of Nanobiotechnology》（影响因子106）上发表了名为“Inhalable biomimetic polyunsaturated fatty acid-based nanoreactors for peroxynitrite augmented ferroptosis potentiated radiotherapy in lung cancer”的研究论文。研究小组设计了一种基于多不饱和脂肪酸（PUFA）的纳米反应器DHA-N@M，并通过吸入给药的方式靶向肺部肿瘤。该纳米反应器的构成是由巨噬细胞膜包裹的DHA-SNO（一种GSH响应性释放NO的PUFA衍生物），具备良好的肿瘤靶向性及GSH响应特性。试验结果显示，DHA-N@M显著提升了药物在肺肿瘤中的蓄积，效果优于传统静脉注射。其作用机制为：通过消耗GSH、释放NO并生成ONOO⁻，诱导肿瘤细胞发生铁死亡，联合放疗使用可协同增强抗肿瘤效果。在肺癌原位模型中，DHA-N@M与放疗联合展示出9391%的肿瘤抑制率，且具有良好的安全性。这项研究为肺癌治疗提供了一种新型的吸入式纳米药物递送系统，通过靶向肿瘤微环境并增强铁死亡，显著提升了放疗效果，展现出重要的临床转化潜力。

### 谷胱甘肽检测试剂盒（abs580006）使用方法

#### 一、试剂盒组分

- 96孔微孔板 1 plate - 
- 检测缓冲液 30 mL × 4 ，储存于4℃ 
- 反应缓冲液 8 mL × 1，储存于4℃ 
- 染料试剂 粉末× 1，避光保存于4℃ 
- 稀释液 4 mL × 1，储存于4℃ 
- 标准品 粉末× 1，避光保存于4℃ 
- 技术手册 1 本 -

#### 二、操作步骤

1. 材料和试剂准备

自备材料：酶标仪、蒸馏水、移液器与枪头、研钵、离心机、计时器、湿冰等。处理标准品时，使用065 mL蒸馏水溶解粉末，混匀后取005 mL溶液加入095 mL蒸馏水中获得浓度为0.5 mmol/L的标准品溶液，储存于4℃。对于Dye Reagent，使用前加入4 mL Diluent溶解。

2. 样本处理

（1）细胞/细菌样本：将细胞/细菌（5×106）收集在离心管中，离心后去掉上清液，加入1 mL Assay buffer，进行超声处理，然后在4℃，8000 g离心10分钟，转移上清液至新管中并在湿冰上待检测。
（2）组织样本：称取0.1 g组织，加入1 mL Assay buffer，湿冰匀浆，再在4℃，8000 g离心10分钟，转移上清液至新管中，湿冰保存待测。
（3）血清/血浆样本：直接测定。

3. 上样及检测

在37℃加热所有试剂后，根据如下表格加样：

• 样品孔： -  80 μL
• 标准品孔： - 80 μL
• 蒸馏水孔： 80 μL -
• 反应缓冲液： 80 μL 80 μL 80 μL
• 染料试剂： 40 μL 40 μL 40 μL

混合均匀，37℃孵育10分钟，在412 nm处测量并记录吸光度。注意：对于标准品可进行2倍连续稀释，生成标准曲线；对于未知样品，建议挑选若干样本进行预实验，以确定浓度和稀释倍数。

4. 标准曲线

标准曲线仅供参考，每次实验需重新绘制，检测范围为0.01 mmol/L - 0.5 mmol/L。

### 常见问题解答

Q1：试剂盒中的96孔微孔板只有一个，后续实验如何处理？
A1：该试剂盒附带的96孔板为赠品，后续可使用常规96孔酶标板替代。

Q2：操作说明中含有标准曲线法和公式法，我该如何选择？
A2：可任选一种方法，公式法较为简便，建议采用标准曲线法以提高准确性。请注意，每次实验需重新绘制标准曲线。

Q3：反应过程中出现沉淀该如何处理？
A3：沉淀一般因蛋白浓度过高，建议将样品离心后取上清液进行检测。

Q4：仪器未设有相应的检测波长怎么办？
A4：如未设置推荐的检测波长，可在说明书建议范围±10 nm内寻找替代波长。

### 品牌推荐

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参考文献：[1] Chen Y, Huang X, Hu R, et al. Inhalable biomimetic polyunsaturated fatty acid-based nanoreactors for peroxynitrite-augmented ferroptosis potentiated radiotherapy in lung cancer. J Nanobiotechnology 2025; 23(1): 338. Published 2025 May 8. doi: 10.1186/s12951-025-03409-8

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