培养条件：气相条件为95%空气和5%二氧化碳，温度保持在37℃。该细胞系由GiardDJ于1972年建立，来源于一位58岁白人男性的肺癌组织。A549细胞通过胞苷二磷脂酰胆碱途径合成富含不饱和脂肪酸的卵磷脂，且为角蛋白阳性。作为经典的人肺癌细胞系，A549源自人类肺腺癌（Adenocarcinoma of the Lung）肿瘤组织，由美国典型培养物保藏中心（ATCC）从该患者的胸腔积液中分离建立，广泛用于肺癌研究、药物开发及分子机制探索。

关于传代，建议首次按照1:2的比例进行传代，而在每次培养时应在两天后更换液体。在细胞接收到后，建议尽快购买培养物，并以优惠方式进行处理。细胞处理后应添加完全培养液并密封瓶口，以确保运输过程中细胞状态良好。

细胞传代步骤如下：

• 第一步，弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
• 第二步，添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶，放置在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。细胞如果已变圆并部分脱落，迅速轻敲培养瓶，加入5ml以上的完全培养基终止消化。
• 第三步，轻轻吹打细胞至完全脱落后，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，再补加1-2ml的完全培养基重悬细胞。
• 第四步，按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代步骤：

• 1、半换液法：将培养瓶竖直放置静置1小时，轻轻吸去3ml培养基，然后补充3ml完全培养基。如果培养基颜色变化缓慢，可以直接加入约500ul的FBS；在传代时可补充5ml培养基，分为两个培养瓶。
• 2、离心换液法：如需分瓶，可将细胞悬液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml培养液重悬，再按1:2的比例分配至新T25瓶中，添加6-8ml的完全培养基，确保细胞生长活力。

细胞冻存注意事项：

• 1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%区域时，请弃去培养液并用PBS清洗一次。
• 2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶，观察细胞回缩变化，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至离心管中进行离心。
• 3. 弃去上清后，沉淀细胞中重复添加1ml的冻存液，混匀后放置于冻存管中。
• 4. 将冻存细胞放入-80℃的冰箱中，如果后期要移入液氮罐，需至少在-80℃保存24小时以上。

细胞复苏步骤：

• 1. 从液氮中取出冻存管（建议佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
• 2. 将细胞移至含5ml完全培养基的离心管中，1000RPM离心5分钟。
• 3. 弃去上清后，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2的培养箱中。
• 4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

**注意事项**：在运输过程中，可能会出现细胞脱落的现象，属于正常情况。如果细胞脱落较多，可以将培养液收集至离心管中，离心后沉淀，处理方法与常规相同。

尊龙凯时致力于提供高品质的细胞培养解决方案，如有任何问题或特殊情况，请及时与我们联系以获得支持与指导。我们的技术团队将根据具体情况协助处理，确保细胞状态良好、生命力强大。